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蛋白酶是什么,有什么應用?

儀器網小編2020-12-25 15:58:05

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蛋白酶廣泛存在于動物內臟、植物莖葉、果實和微生物中。微生物蛋白酶,主要由霉菌、細菌,其次由酵母、放線菌生產。

水解蛋白質肽鍵的***類酶的總稱。按其水解多肽的方式,可以將其分為內肽酶和外肽酶兩類。內肽酶將蛋白質分子內部切斷,形成分子量較小的月示和胨。外肽酶從蛋白質分子的游離氨基或羧基的末端逐個將肽鍵水解,而游離出氨基酸,前者為氨基肽酶后者為羧基肽酶。按其活性中心和***適pH值,又可將蛋白酶分為絲氨酸蛋白酶、巰基蛋白酶、金屬蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶。按其反應的***適pH值,分為酸性蛋白酶、中性蛋白酶和堿性蛋白酶。工業生產上應用的蛋白酶,主要是內肽酶。

蛋白酶廣泛存在于動物內臟、植物莖葉、果實和微生物中。微生物蛋白酶,主要由霉菌、細菌,其次由酵母、放線菌生產。

催化蛋白質水解的酶類。種類很多,重要的有胃蛋白酶、胰蛋白酶、組織蛋白酶、木瓜蛋白酶和枯草桿菌蛋白酶等。蛋白酶對所作用的反應底物有嚴格的選擇性,***種蛋白酶僅能作用于蛋白質分子中***定的肽鍵,如胰蛋白酶催化水解堿性氨基酸所形成的肽鍵。蛋白酶分布廣,主要存在于人和動物消化道中,在植物和微生物中含量豐富。由于動植物資源有限,工業上生產蛋白酶制劑主要利用枯草桿菌、棲土曲霉等微生物發酵制備。

胰蛋白酶的作用是使細胞間的蛋白質水解從而使細胞離散。不同的組織或者細胞對胰酶的作用反應不***樣。胰酶分散細胞的活性還與其濃度、溫度和作用時間有關,在pH為8.0、溫度為37℃時,胰酶溶液的作用能力***強。使用胰酶時,應把握好濃度、溫度和時間,以免消化過度造成細胞損傷。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白質可降低胰酶的活性,所以配制胰酶溶液時應選用不含Ca2+、Mg2+的BSS,如:D-Hanks液。終止消化時,可用含有血清培養液或者胰酶抑制劑終止胰酶對細胞的作用。

1.稱取胰蛋白酶:按胰蛋白酶液濃度為0.25%,用電子天平準確稱取粉劑溶入小燒杯中的雙蒸水(若用雙蒸水需要調PH到7.2左右)或PBS(D-hanks)液中。攪拌混勻,置于4℃內過夜。

2.用注射濾器抽濾消毒:配好的胰酶溶液要在超凈臺內用注射濾器(0.22微米微孔濾膜)抽濾除菌。然后分裝成小瓶于-20℃保存以備使用。

胰蛋白酶能夠催化蛋白質的特定肽鍵水解,這個催化過程是不需要能量的,不會使酶失去活力,也不會改變形狀和使自身水解。底物與酶的活性中心的結合是可逆的,這種結合使得蛋白質特定肽鍵因彎曲變形而被活化,更易于受到水分子的攻擊,分別形成氨基和羧基而斷裂,得到小分子多肽或氨基酸。不同的蛋白酶可以作用在不同氨基酸相連組成的肽鍵,因此胰蛋白酶并不能作用在所有的肽鍵。


(來源: 儀器網小編)


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